慢病毒包装、纯化、感染

纯化慢病毒滴度低

纯化前的细胞培养上清中的慢病毒滴度较低

更换成慢病毒滴度较高的细胞培养上清，重新纯化，或浓缩样品。

含慢病毒的细胞培养上清用量较少

增加纯化体系中慢病毒上清液用量，或扩大纯化体系。

纯化试剂过期

保证使用保质期内的试剂。

磁珠冻存，吸附慢病毒能力降低甚至消失

更换新的磁珠或试剂盒。

未按规定体积添加磁珠，磁珠用量减少

按照纯化体系要求，正确使用磁珠。

未按照体系要求，随意更改体系中各试剂比例

按照纯化体系要求，按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。

磁珠与慢病毒上清液孵育时间偏短

延长孵育时间。

洗脱强度偏低

增加Vortex强度，延长Vortex时间。

慢病毒上清液被微滤膜过滤，慢病毒减少

慢病毒上清液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤，以及更小孔径滤膜的滤器过滤。

纯化的慢病毒溶液被微滤膜过滤，慢病毒减少

纯化的慢病毒溶液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤，以及更小孔径滤膜的滤器过滤。请使用试剂盒提供的大孔径滤膜过滤。

慢病毒上清液被高速离心，导致慢病毒减少

慢病毒上清液离心条件是：1,000 rpm（100 g），4℃，离心5 min，去除细胞碎片等杂质即可。

纯化的慢病毒感染效率偏低

纯化的慢病毒用量较少

增加纯化的慢病毒用量。

Polybrene效率偏低

使用本公司的慢病毒感染增强试剂盒。

细胞密度偏大

慢病毒感染时，细胞密度控制在70%以下。

细胞状态差

请使用状态较好的对数生长期细胞做慢病毒感染。

纯化的慢病毒反复冻融，导致活性降低

纯化的慢病毒4℃保存，1个月用完。

慢病毒感染增强效果不显著

慢病毒感染增强试剂过期

请查阅试剂生产日期，确保试剂在保质期内。

存储不当导致感染增强试剂失效

试剂A与试剂C严禁冻存，否则失效。而试剂B长期保存在-80 ℃。

慢病毒滴度过低

纯化慢病毒，或重新包装慢病毒，提高慢病毒滴度。

慢病毒用量偏少

增加慢病毒用量。

细胞状态不好

请选择对数生长期细胞进行慢病毒感染实验。

细胞密度过大

降低细胞密度。

细胞毒性大

感染增强试剂用量过大

按比例缩减感染增强试剂的用量。

慢病毒感染增强试剂添加不均匀

不要直接将慢病毒感染增强试剂添加到细胞培养液中，应该先与部分细胞培养液混合，再加入细胞培养板中。

细胞密度过低

提高感染时细胞密度。

细胞状态较差

请使用生长状态良好的细胞做慢病毒感染。

细胞株特异性。

对于慢病毒感染增强试剂，悬浮细胞一般比贴壁细胞敏感，原代培养细胞比细胞株敏感。在敏感细胞株中，按比例减少各试剂用量。