慢病毒滴度快速检测卡

一、运输和存储条件。

本产品常温运输，室温避光保存。

二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）。

1.    室温避光保存，保持干燥。

2.    建议使用含有慢病毒的细胞培养上清直接检测慢病毒滴度，若测量值超过最高滴度，请用PBS稀释（100倍或50倍稀释）后再检测，测量值乘以稀释倍数即为细胞培养上清中的慢病毒滴度。

3.    为了您的健康，请穿实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜，使用生物安全柜。

三、产品简介。

本产品是以胶体金免疫层析技术为基础，通过快速检测慢病毒和假病毒外壳上的P24蛋白来确定病毒滴度的检测卡。本检测卡由样品窗（S）、质控线（C）和检测线（T）三部分组成。待测样品滴加到样品窗（S）中后，样品中的P24蛋白首先与胶垫上的胶体金标记的P24鼠单克隆抗体结合形成复合体，通过毛细电泳作用泳向检测线和质控线，到达检测线，被检测线上的另外一种P24鼠单克隆抗体识别并捕获。随着被捕获的复合体的堆积，检测线呈现出酒红色。当复合体继续向前泳动到质控线时，P24鼠单克隆抗体被质控线上的胶体金标记的羊抗鼠多克隆抗体捕获，质控线呈现出酒红色。通过判读检测线和质控线是否显色，即可判断样品中是否存在 P24蛋白。P24蛋白浓度与检测线颜色的深浅呈正相关，通过与比色卡（图1）对比，即可定量检出样品中的P24蛋白浓度，进而大致估算出慢病毒滴度。

四、检测卡用途：

1.    评估基于HIV-1的慢病毒或假病毒包装效率。

2.    估算基于HIV-1的慢病毒或假病毒滴度。

五、特点与优势。

1.   本产品操作简便，可快速检测慢病毒或假病毒的滴度。

2.   使用少量样品即可初步评估慢病毒包装效率。

六、使用说明

1.    打开包装，取出检测卡，平放在生物安全柜中。

2.    用移液器吸取80 μl含有慢病毒的细胞培养上清或纯化慢病毒溶液，加入样品窗S中。

3.    室温静置10-15 min，判读结果。（15 min读取效果最佳，20 min内完成结果判读。）

4.    结果判读：

1)    质控线（C）不显色，无论检测线（T）是否显色，检测结果均无效。

2)    质控线（C）和检测线（T）均显色，为阳性，即样品中含有慢病毒或假病毒。

3)    质控线（C）显色，检测线（T）显色达到最深条带，用PBS适当稀释（100倍或50倍稀释），重新检测。

4)    质控线（C）显色，检测线（T）不显色，检测结果为阴性，即不含慢病毒。

5)    慢病毒滴度评估。比对检测卡中检测线的颜色与图1中色谱条带颜色深浅，根据表1中所列出的P24蛋白浓度与慢病毒滴度之间的关系，大致估算出样品中的慢病毒滴度。

表1. P24蛋白浓度与慢病毒滴度关联表

七、慢病毒滴度估算原理：

1.        一个慢病毒颗粒（Lentiviral Particle, LP）中约有2000个P24蛋白分子，用以下公式可以计算慢病毒的颗粒数（LP）。

2.        一个LP相当于：2000×24×103/(6×1023) g of P24 = 8×10-5 pg P24；或者说1 ng P24=1.25×107 LPs（≈1.25×104-5 TU）。

3.        正常情况下，每100-1000 LPs中会有1个具有感染活性的病毒载体，即1 TU（Transducing Unit）。

4.        上述公式计算得到的 LP 值是理论值，检测样品中游离的 P24 蛋白可能会使该值偏高。

5.        本产品是半定量检测卡，数据仅供参考。

八、常见问题与分析