Omifection(质粒DNA转染试剂)

一、运输与存储条件

   本产品常温运输，4 ℃ 保存、严禁冻存。

二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）

1.   请利用对数生长期的细胞做质粒DNA转染实验，一般在细胞传代后24-36 h，开始转染质粒DNA，可以提高转染效率。

2.   细胞密度对转染效率也具有很大的影响，请选择汇合度为50-80%的对数生长期细胞进行质粒DNA转染实验，可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。

3.   质粒DNA的质量直接影响转染效率。建议选择高纯度的质粒DNA（OD260/280在1.7~1.9之间）进行细胞转染实验，质粒DNA浓度建议在0.2 μg/ μl以上。

4.   质粒DNA与Omifection混合后孵育时间不宜太短，建议15-30 min（30 min转染效果会更好），以免转染复合体形成减少，降低转染效率。

5.   Omifection在大多数细胞系和原代细胞中没有明显的细胞毒性，转染后可以不换培养液，或24 h后再置换培养液。

6.   悬浮细胞转染质粒DNA时，请转染24 h后换液，使转染复合体能够完全被细胞吞噬。

7.   转染12 h后，质粒携带的外源基因（如GFP）开始表达，24 h后表达50-70%，48 h后表达量达到顶峰。更换新鲜的培养液可以刺激外源基因的表达。因此，检测外源基因表达水平时，请在48 h后观察，或收集细胞检测，可以得到较好的实验结果。

8.   本试剂4 ℃保存，严禁冻存。冻存后严重降低试剂的转染效率，甚至导致试剂完全失效。

三、产品简介

Omifection是一款非脂质体类真核细胞DNA转染试剂，主要用于质粒DNA转染，在多种细胞中都具有较高的转染效率和超低的细胞毒性，广泛用于蛋白表达、文库筛选和慢病毒包装等实验。

四、特点与优势

1.   转染效率高。在多种细胞中能够高效介导质粒DNA的转染和外源基因的表达。

2.   细胞毒性低。Omifection对大多数细胞系和原代细胞没有毒性，转染后可以不更换细胞培养液。

3.   操作方便。本产品不受抗生素和血清的影响，转染前细胞不用换液。

五、使用说明

以6孔细胞培养板培养的贴壁细胞作为实验体系，细胞转染实验步骤如下：

1.    细胞培养。胰酶消化法收集细胞，计数后接种到6孔板中，24 h后细胞密度达到50%-80%。

2.    转染复合体制备。移取200 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco）加入灭菌的EP管（1.5 mL)中，再依次加入2 μg质粒（质粒体积依据质粒浓度计算）和6 μL Omifection转染试剂，混合10-20次，室温静置15-30 min （30 min转染效果会更好），形成转染复合体。

3.    细胞转染。将转染复合体加入细胞培养液中，轻摇混匀，转入CO2培养箱中继续培养。

4.    转染12-24 h后换液，48 h检测外源蛋白表达情况（如荧光显微镜下检测GFP荧光）。

表1. DNA、Omifection与OPTI-MEM用量表

六、常见问题与分析