小细胞外囊泡(sEVs)专用无血清培养基

一、 运输与存储条件

   本产品低温运输，有效期1 年。

二、 注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）

1. 配制成完全培养基后，避光保存在2~8℃可存放2-4周。

2. 为了更好的使用效果，请勿对试剂进行反复冻融。

3. 超过产品标签上的截止使用日期，不得再使用。

三、 产品简介

本产品采用最新无血清培养基配方，含有丰富的细胞因子和生长因子在细胞培养过程中无需加入血清，规避了传统的含胎牛血清的培养基所带来的引入异源成分、成分不明确等缺点。

四、 特点与优势

1. 营养全面，性能稳定，性价比高。

2. 全程无血清生产，极大降低批次间差异。

五、 使用说明

将无血清生长添加剂在2-8℃融化，按1:20比例加入基础培养基中，即成为外泌体专用完全培养基。使用前在室温下预温15-30 min，时间不宜过长，请勿强光或紫外照射。

外泌体专用完全培养基2~8℃条件下，可保存30天。若小量、多次使用，建议您将无血清生长添加剂分装后，保存于-20℃冰箱，可避免培养基不必要的浪费。

1. 间充质干细胞复苏（以T-75瓶为例）

1) 取出完全培养基，在生物安全柜或超净台中吸取适量（如T-75瓶：15 ml）完全培养基沿上表面加入间充质干细胞培养瓶中，切勿冲到细胞培养瓶底面，即：细胞生长面。然后慢慢将细胞培养瓶平放。

2) 从液氮中取出冻存的间充质干细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴中，快速摇晃融解。

3) 在生物安全柜或超净台中打开冻存管，将细胞悬液缓慢移入装有5-10 ml完全培养基的离心管中。

4) 1,000 rpm离心5 min，弃上清，加入2 mL完全培养基重悬细胞，将细胞接种至培养瓶中，添加细胞时，将细胞培养瓶竖立，细胞悬液直接加到底部，切忌冲到细胞培养瓶底面。轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布，置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中静置培养24 h后，更换新鲜的完全培养基。

2. 间充质干细胞传代（以T-75瓶为例）

1) 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。

2) 在生物安全柜或超净台中，弃去细胞培养瓶中的培养液，加入5-10 ml PBS清洗细胞后弃去，再加入3 ml胰酶消化细胞。

3) 在显微镜下观察到细胞全部收缩变圆时，立即加入2倍体积的胰酶使用量的完全培养基终止消化。

4) 用移液器轻轻吹打瓶壁上还未完全脱离的细胞，并吹打混匀，使细胞分散。

5) 将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1,000 rpm离心5 min。弃上清，加入2 mL完全培养基重悬细胞，台盼蓝染色计数，按细胞密度1×10⁴ cells/cm²细胞接种到培养瓶中。

6) 轻轻摇晃细胞培养器瓶，使细胞均匀分布，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的培养箱中静置培养。

3. 间充质干细胞冻存

1) 参照细胞传代消化细胞，并离心，重悬计数。

2) 1,000 rpm离心5 min，弃上清。

3) 根据细胞数量，缓慢加入无血清冻存液，调整细胞密度在1×10⁶ -1×10⁷ cells/ml。

4) 轻轻吹打混匀细胞，将重悬均匀的细胞等分加入到无菌冻存管中（提前做好标记），拧紧冻存管盖。

5) 迅速将冻存管放入程序降温盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃冰箱（若为无血清非程序性细胞冻存液，可以直接放入-80℃）。

6) 过夜后，将细胞从-80℃冰箱转移至液氮中长期保存。